更新時間：2023-07-06 
瀏覽次數：1644規格：100T/96S
產品內容：
提取液：液體100mL×2瓶，4℃保存。試劑一：粉劑×1瓶，常溫保存。
微量法
標準品：粉劑×1支，10mg單寧酸，4℃保存。臨用前加入1.175mL提取液溶解為5000nmol/mL的標準液。
產品說明：
單寧又稱植物多酚，是一類廣泛存在于植物體內的多元酚化合物。單寧可作為潛在的生物標記物；與蛋白質結合的能力又稱為收斂性或澀性。其收斂性是多種生理活性的基礎，如止血、抗腫瘤、抗衰老等生理活性，也是影響產品口感的因素之一。
根據光譜特性，單寧在275nm下有較強的紫外吸收，通過利用活性炭能夠特異吸附單寧的性質來檢測單寧含量。
自備實驗用品及儀器：
紫外分光光度計/酶標儀、離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板和蒸餾水。
測定操作：
1、樣本處理：
將樣本烘干至恒重，粉碎，過40目篩之后，稱取約0.05g，加入1mL提取液，封口膜封口防止液體濺出，于70℃水浴提取30min，期間可搖晃數次。12000rpm，25℃，離心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待測。
2、操作步驟：
（1）紫外分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調至275nm。蒸餾水調零。
（2）將5000nmol/mL標準液用提取液稀釋為6.25、3.125、1.5625、0.78625、0.4、0.2nmol/mL標準溶液。
（3）加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
試劑一 | 大約5-7mg | - | - | 大約5-7mg |
蒸餾水 | - | - | - | 0.5mL |
標準溶液 | - | - | 0.5mL | - |
樣品 | 0.5mL | 0.5mL | - | - |
充分混勻震蕩5min，13000g 離心20min。取200µL上清液測定275nm下的吸光度，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管，計算?A測定=A對照管-A測定管，A標準=A標準管-A空白管。
單寧含量計算：
1、標準曲線的繪制：
以標準溶液的濃度為x軸，以A標準為y軸，繪制標準曲線，得到方程y=kx+b，將?A測定帶入方程中得到x（nmol/mL）
2、單寧含量計算：
1. 按蛋白濃度計算：
單寧含量（nmol/mg prot）=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr。
2. 按樣本鮮重計算：
單 寧 含 量 （nmol/g 鮮 重 ）=x×V 提 取 ÷W =x÷W 。Cpr： 樣品蛋白濃度，mg/mL（蛋白濃度需重新用PBS提取測定）；W：樣品質量，g；V提取：
提取液體積，2mL。
注意事項：
1、 當?A大于1.5時，建議將樣品上清液用提取液稀釋更大倍數后測量；?A過小時，建議減少稀釋倍數或增加樣品質量來測定。
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