上海ELISA試劑盒應用中顯色、比色問題講解

更新時間：2017-02-21

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在上海ELISA試劑盒實驗中各種酶標儀性能都會有所不同，所以在使用中應詳細閱讀說明書，再進行下一步操作。
自從20世紀60-70年代問世以來，上海ELISA試劑盒法得到*科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。ELISA試劑盒有著準確性高、靈敏度高、特異性強等很多的優點，它在檢測抗體、抗原等方面有很好的應用，深受廣大用戶朋友的喜愛。然而，在實驗過程中，也需要注意很多問題，特別是顯色、比色問題。
顯色是上海ELISA試劑盒中的zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色適當縮短或延長反應時間，及時判斷。
上海ELISA試劑盒OPD（鄰苯二胺）底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產物用硫酸終止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
TMB（四甲基聯苯胺）受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩定性，宜在規定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。

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